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《水科學(xué)進(jìn)展》2018年第2期

[摘要]目的觀察無果枸杞芽水提物（FLSAE）促眠效果。方法選取成年2月齡C57BL/6J小鼠，采用戊巴比妥鈉協(xié)同F(xiàn)LSAE致小鼠睡眠的方法。將FLSAE按照5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的濃度溶解在蒸餾水中，0.2mL/10g•d，灌胃給藥，持續(xù)11d，對照組給予等量蒸餾水，觀察小鼠入睡潛伏時間和睡眠持續(xù)時間。在上述研究的基礎(chǔ)上，找出最佳藥物濃度，檢測各時間點(diǎn)小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間，篩選出最佳起效時間點(diǎn)。結(jié)果與對照組比較，F(xiàn)LSAE各濃度組小鼠睡眠潛伏期均縮短（P<0.05），睡眠時間均延長（P<0.01）；以中濃度組（10mg/kg）延長小鼠睡眠時間最為顯著（P<0.05）。以10mg/kg給藥，給藥第1d，與對照組比較，小鼠睡眠潛伏期有縮短（P<0.05）、睡眠時間有延長（P<0.05）；至灌胃給藥5d時小鼠睡眠時間延長最顯著，與對照組比較，P<0.01，與其它給藥時間點(diǎn)比較，P<0.05；至灌胃11d小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間與對照組比較，P<0.05。結(jié)論FLSAE能夠促進(jìn)小鼠的睡眠，其中10mg/kg組灌胃5d促進(jìn)小鼠睡眠效果最佳。

[關(guān)鍵詞]睡眠；無果枸杞芽；量效；時效

隨著工作節(jié)奏的加快和生活壓力的增加，失眠的人數(shù)逐年增加。探尋毒副作用小，效果穩(wěn)定可靠的、改善和治療失眠的藥材是研究者關(guān)注的熱點(diǎn)，國內(nèi)關(guān)于中藥材改善睡眠研究報(bào)道較多[1-5]。枸杞為傳統(tǒng)中藥材，其葉和果都具有安神功效。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)寧夏枸杞類新產(chǎn)品無果枸杞芽茶可改善中老年人睡眠，為進(jìn)一步研究其改善睡眠的量效、時效及可能機(jī)制，本研究采用戊巴比妥鈉協(xié)同無果枸杞芽水提物（FruitlessLyciumSproutAqueousExtract，F(xiàn)LSAE）所致小鼠睡眠的方法，對FLSAE影響小鼠睡眠的量效和時效關(guān)系進(jìn)行研究，明確FLSAE改善睡眠的最佳劑量和作用時間，以期為FLSAE改善睡眠作用的機(jī)制研究提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物：兩月齡SPF級C57BL/6J小鼠由寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號：SCXK（寧）2005-0001，雌雄各半，喂養(yǎng)于晝夜12h交替、室溫（24±2）℃環(huán)境中，自由進(jìn)食。

1.2.2主要試劑：無果枸杞芽干品由寧夏杞芽食品科技有限公司提供，無果枸杞芽水提取物由寧夏回族自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備，制備方法如下。1.2方法1.2.1FLSAE的制備：將無果枸杞芽干品浸泡12h，煎煮5h之后，過濾取出藥液，藥渣加冷水再煎，反復(fù)三次，將藥液合并，靜置沉淀，再用4層紗布過濾3次，煎出的藥液放到小火上煎煮蒸發(fā)濃縮，使之逐漸形成稠膏狀。采用水提法制作無果枸杞芽浸膏，每克無果枸杞葉浸膏含生藥量約3.17g。以小鼠體重20g相當(dāng)于成人體重60kg為參考進(jìn)行中草藥的劑量換算（2005版《中國藥典》）。

1.2.2FLSAE改善小鼠睡眠的量效關(guān)系研究：將40只小鼠隨機(jī)分為：低劑量（5mg/kg，F(xiàn)LSAE1）組、中劑量（10mg/kg，F(xiàn)LSAE2）組、高劑量（20mg/kg，F(xiàn)LSAE3）組和對照組，每組10只。將FLSAE按照不同濃度溶解在蒸餾水中，按0.2mL/10g體重，1次/d，灌胃給藥，對照組灌胃等量蒸餾水。每天定時灌胃給藥，30min后，腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg，將小鼠腹部朝上放在37°C溫?zé)岚迳希苑瓷湎r間記為睡眠潛伏時間，以翻正反射消失的持續(xù)時間記為睡眠時間（即翻正反射消失時間至翻正反射重復(fù)出現(xiàn)時間），持續(xù)11d，觀察小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間。

1.2.3FLSAE改善小鼠睡眠的時效關(guān)系研究：在FLSAE改善小鼠睡眠的量效關(guān)系研究的基礎(chǔ)上，選取最佳促眠藥物濃度組，分析1、3、5、7、9、11d小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間，篩選出最佳給藥時間。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以sx±表示，比較采用單因素方差分析，兩兩之間比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1無果枸杞芽提取物促眠作用的量效關(guān)系研究：與對照組比較，無果枸杞芽提取物各濃度均可縮短小鼠睡眠潛伏時間（P<0.05），并延長各組小鼠睡眠時間（P<0.05）。其中以中濃度組（10mg/kg）效果最顯著，與其它濃度組比較，有顯著差異（P<0.05）。

2.2無果枸杞芽提取物促眠作用的時效關(guān)系研究：無果枸杞芽提取物以10mg/kg灌胃，給藥1d時開始起效，與對照組比較，對小鼠入睡的潛伏時間有縮短作用，對小鼠睡眠持續(xù)時間有延長作用，有顯著性差異（P<0.05）；至給藥3d時，對小鼠睡眠潛伏期縮短最顯著，至連續(xù)給藥5d時，對小鼠睡眠持續(xù)時間延長作用最顯著，與其它時間點(diǎn)FLSAE組比較，有顯著性差異（P<0.01）；至給藥11d，小鼠睡眠持續(xù)時間的延長作用及對入睡潛伏時間的縮短作用仍然保持，與對照組比較差異顯著（P<0.05）。

3討論

睡眠不僅是維持個體生存所必需的過程，并促進(jìn)機(jī)體生長，促進(jìn)腦功能發(fā)育、發(fā)展、保持腦的能量、鞏固記憶及保證大腦發(fā)揮最佳功能，增強(qiáng)免疫力，延緩衰老等多方面功能。隨著生活節(jié)奏的加快及生活壓力的增加，失眠的人數(shù)逐年增加,據(jù)調(diào)查約33％的美國人、37.2％的法國和意大利人、38.2％的中國城市居民患有失眠[1-4]。目前臨床常用鎮(zhèn)靜催眠藥可緩解患者入睡困難、増加睡眠時間，但常引起次日頭暈、嗜睡等現(xiàn)象，且長期使用會產(chǎn)生藥物耐受性、依賴性和成癖性[1]。中醫(yī)中藥治療失眠效果顯著，近年來，國內(nèi)許多學(xué)者致力于中藥促眠作用研究，如酸棗仁總皂苷棗仁顆粒、人參益智膠囊等都有較好的促眠作用，但煎藥、藥味、方便性等方面限制其使用和發(fā)展[5-13]，故探尋藥食同源、毒副作用小、效果穩(wěn)定可靠的促眠中藥材是研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。枸杞和枸杞葉的安神作用早在唐代甄權(quán)的《藥性論》中就有記載：臣，子葉同說，味甘，平。能補(bǔ)益精諸不足，易顏色，變白，明目，安神，令人長壽。寧夏枸杞類新產(chǎn)品無果枸杞芽多種有效成分和生物活性物質(zhì)明顯高于枸杞果有果枸杞葉，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)泡服無果枸杞芽（葉）茶可改善失眠患者的睡眠。為進(jìn)一步研究寧夏無果枸杞芽促眠功效，本實(shí)驗(yàn)觀察了FLSAE促眠的最佳濃度和最佳起效時間，以期為FLSAE促眠作用機(jī)制研究提供先期準(zhǔn)備。

結(jié)果在寧夏FLSAE促眠作用的量效關(guān)系研究中，在本實(shí)驗(yàn)所設(shè)的3個濃度中，各濃度組均有促眠作用，其中10mg/kg濃度組效果最佳，此結(jié)果提示在10mg/kg濃度范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，促眠作用增強(qiáng)，當(dāng)大于10mg/kg濃度范圍后，隨著藥物濃度的增加，促眠不再增強(qiáng)。在FLSAE促眠作用的時效關(guān)系研究中，以10mg/kg灌胃，給藥1d時對小鼠入睡的潛伏時間有縮短作用，對小鼠睡眠持續(xù)時間有延長作用；至連續(xù)給藥5d時，對小鼠睡眠持續(xù)時間延長作用最顯著，至給藥11d，小鼠睡眠持續(xù)時間的延長作用及對入睡潛伏時間的縮短作用仍然保持，此結(jié)果提示FLSAE用藥5d促眠作用最佳，至用藥11d仍有促眠作用，課題組也曾觀察至灌藥21dFLSAE促眠作用仍然保持，說明無藥物耐受性。本研究結(jié)果表明寧夏無果枸杞芽具有促眠作用，因?qū)幭臒o果枸杞芽中含有多種營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)（如黃酮類、萜類化合物、微量元素、維生素E/C、生物堿等），到底哪些成分、通過哪些途徑起促眠作用有待進(jìn)一步深入研究。

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作者：侯亞楠3;楊曉婷3;黃辰3;吳彪3;王君潔3;仇萌萌3;宋東3;苗婷婷3;張蓮香1,2 單位：寧夏醫(yī)科大學(xué)：1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)系，2.顱腦疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，3.臨床醫(yī)學(xué)院