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1質(zhì)譜法(MS)

1.1液相色譜－質(zhì)譜法(LC－MS)液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀是聯(lián)合了液相色譜與質(zhì)譜的儀器，它以色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品經(jīng)分離后離子化，離子碎片通過質(zhì)量分析器按質(zhì)荷比分開得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用結(jié)合了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢，色譜分離能力強(qiáng)，質(zhì)譜選擇性高、靈敏度高并且能夠提供樣品分子量與結(jié)構(gòu)信息，二者結(jié)合起來，在藥物殘留等分析領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。曲斌等利用高氯酸酸化尿液，過固相萃取柱凈化的方法，經(jīng)LC－MS測定豬尿中的苯乙醇胺A，定量限達(dá)到了0.2μg/L。盧艷芬采取LC－MS法測定豬肉中殘留的苯乙醇胺A，在前處理過程中經(jīng)酶解、酸化和調(diào)節(jié)樣品溶液pH以提高萃取效率。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在52℃水浴酶解2h，酶解濃度達(dá)到峰值，檢測限和定量限分別為0.2μg/kg和0.5μg/kg，回收率大于79.0%。目前，因分析時(shí)間短、檢測限低以及定性分析結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，LC－MS法已經(jīng)作為檢測苯乙醇胺A殘留的確證方法。其缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴、檢測成本高、檢測技術(shù)難以掌握、應(yīng)用還不夠普遍。

1.2氣相色譜－質(zhì)譜法(GC－MS)GC－MS與LC－MS主要的區(qū)別在于色譜，LC－MS的流動相為液體，而GC－MS的流動相是惰性氣體，另外在前處理方面1個(gè)主要的區(qū)別是GC－MS需要對樣品中目標(biāo)化合物分子的氨基、羥基等極性基團(tuán)衍生化，相比LC－MS前處理過程更加繁瑣。所以目前國內(nèi)關(guān)于GC－MS檢測苯乙醇胺A的報(bào)道很少。楊正彗以pH值3.6的乙酸鈉緩沖液為提取液，通過MCX小柱凈化，運(yùn)用GC－MS法檢測飼料樣品中的苯乙醇胺A。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，樣品加入80μL衍生化試劑在60℃下反應(yīng)，運(yùn)用SIM采集模式，檢測結(jié)果有較好的靈敏度和重現(xiàn)性，檢出限達(dá)到了3.8μg/L。

2酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

酶聯(lián)免疫吸附法是通過抗原與抗體的特異性反應(yīng)，將酶與待測物連接，而后酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，多用于篩選和定量。酶聯(lián)免疫吸附法包括雙抗體夾心法、雙位點(diǎn)一步法、檢測法測抗體、競爭法、捕獲法測IgM抗體、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA法。目前，ELISA法在實(shí)驗(yàn)室有著廣泛的應(yīng)用，操作簡單、快速是其主要特點(diǎn)，適合于大量樣品的快速篩選檢測，尤其是基層獸藥殘留監(jiān)管部門普遍采用的方法。曹碧云建立了檢測飼料和動物組織中苯乙醇胺A間接競爭的ELISA法，該方法靈敏度高，特異性高，回收率為92.2%～113.7%，檢出限達(dá)到了0.003μg/L[9]。但ELISA法也有著致命的缺點(diǎn)，那就是假陽性率還比較高，對于篩選出來的陽性樣品還需要通過液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用方法確證。

3電化學(xué)發(fā)光免疫分析法

電化學(xué)發(fā)光是1種集合了電化學(xué)與發(fā)光分析的痕量分析技術(shù)，具有高靈敏度和可控性好的優(yōu)點(diǎn)。免疫傳感器是把特異性的免疫反應(yīng)與高靈敏度的傳感技術(shù)結(jié)合，用來監(jiān)測抗原－抗體反應(yīng)的一種生物傳感器。將電化學(xué)發(fā)光與免疫傳感技術(shù)相結(jié)合，則在新型瘦肉精檢測領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。湯慶會等建立的基于量子點(diǎn)和酶放大電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測苯乙醇胺A過程中，與電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度成線性關(guān)系的苯乙醇胺A濃度被拓寬到0.05～1000μg/L，檢出限達(dá)到了0.015μg/L[8]。閆盼盼分別以巰基乙酸和檸檬酸三鈉作為穩(wěn)定劑和還原劑，利用合成的CdSe量子點(diǎn)和膠體金組建成了一種電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，并實(shí)際用于豬肝、豬肉和尿液樣品中苯乙醇胺A的檢測，回收率為82%～124%，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和選擇性良好[13]。

4小結(jié)

綜上所述，在現(xiàn)有的苯乙醇胺A殘留檢測方法中，高效液相色譜法、氣相色譜－質(zhì)譜法、液相色譜－質(zhì)譜法具有較高的靈敏度，其中液相色譜－質(zhì)譜法被農(nóng)業(yè)部1486號公告用作飼料中苯乙醇胺A的確證方法，但對儀器設(shè)備和人員素質(zhì)要求比較高；酶聯(lián)免疫檢測法快速、簡單，主要用于篩選檢測，電化學(xué)發(fā)光免疫傳感技術(shù)靈敏、快速，能夠?qū)Ρ揭掖及稟進(jìn)行現(xiàn)場監(jiān)測，是今后新型瘦肉精殘留檢測的重要研究方向。只有不斷完善新型瘦肉精的監(jiān)測手段，提高檢測水平，才能夠保證動物性食品的質(zhì)量安全。

作者：朱英才 彭強(qiáng) 單位：重慶市獸藥飼料檢測所