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鬼針草為菊科植物鬼針草屬多種植物的全草，藥材資源豐富，廣泛分布于熱帶及溫帶地區(qū)，遍布全國(guó)各地，極易采集。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，鬼針草屬多種植物含有槲皮素成分［1］；槲皮素具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、鎮(zhèn)痛、抗血小板聚集、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等作用［2～4］?！吨袊?guó)藥典》尚未收載鬼針草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?！顿F州中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.、鬼針草BidensbipinataLinn.的干燥全草，《湖南中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.的干燥地上部分，《甘肅中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1995年收載鬼針草BidensbipinataLinn.，《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1990年收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.、白花鬼針草BidenspoilsaL.var.radiataSch.-Bip.的干燥全草，河南中藥材標(biāo)準(zhǔn)1991年收載三葉鬼針草BidenspoilsaL.、鬼針草BidensbipinataLinn.、金盞銀盤Bidensbiternata(Lour.)Merr.EtSherff.的干燥全草，《上海中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載鬼針草BidensbipinataLinn.（婆婆針）的干燥地上部分［5］。從國(guó)內(nèi)地方標(biāo)準(zhǔn)收載情況可以看出全國(guó)各地均有廣泛的應(yīng)用，入藥部位為全草或地上部分，本實(shí)驗(yàn)擬采用RP-HPLC法建立鬼針草屬藥材中槲皮素的含量測(cè)定方法并比較鬼針草不同藥用部位和不同種中槲皮素的含量，為該類藥材的傳統(tǒng)入藥部位是否正確和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。
1儀器與材料
美國(guó)waters2695高效液相色譜儀，VWD檢測(cè)器；鬼針草采自云南紅河州、廣西，經(jīng)劉圓副教授和戴斌教授鑒定為菊科鬼針草屬植物狼杷草BidenstriparticaLinn.，白花鬼針草BidenspilosaL.var.ratiataSch-Bip.，婆婆針BidensbipinataLinn.，三葉鬼針草BidenspilosaLinn.的干燥全草；槲皮素（批號(hào)081-9304，中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用）；甲醇為色譜純；水為二次重蒸水；其余試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件KrosmasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm），柱溫30℃，流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（41∶59），檢測(cè)波長(zhǎng)360nm，流速1ml·min-1。槲皮素峰可以達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱，分離度好，按照槲皮素峰計(jì)，理論塔板數(shù)不應(yīng)低于5000。見圖1～8。
圖1槲皮素對(duì)照品色譜圖（略）
圖2三葉鬼針草（云南產(chǎn)）根色譜圖（略）
圖3三葉鬼針草（云南產(chǎn)）莖色譜圖（略）
圖4三葉鬼針草（云南產(chǎn)）葉色譜圖（略）
圖5狼杷草色譜圖（略）
圖6白花鬼針草色譜圖（略）
圖7婆婆針色譜圖（略）
圖8三葉鬼針草色譜圖（略）
2.2供試品溶液的制備
2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇配置成0.04mg·ml-1的溶液。
2.2.2樣品溶液的制備稱取鬼針草藥材粉末（過(guò)40目篩）約1.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中加入甲醇-25﹪鹽酸溶液（4∶1）25ml，稱定重量，加熱回流1h，取出，冷卻至室溫，用上述混合溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，作為樣品溶液。
2.3線性關(guān)系的考察分別精密量取上述對(duì)照品溶液0.5，2，4，8，20μl，在上述色譜條件下測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=3×106X-33404，R2=0.9999(n=5)。結(jié)果表明槲皮素在0.02～0.80μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。
2.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶（0.04mg·ml-1）10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積的RSD為0.97%（n=6）。結(jié)果表明精密度良好。
2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密量取樣品溶液10μl，分別于0，2，4，6，8h測(cè)定。按照槲皮素對(duì)照品峰面積計(jì)算RSD為0.6%（n=6）。結(jié)果表明樣品溶液在配制后8h內(nèi)穩(wěn)定。
2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品溶液，精密稱取6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定槲皮素的含量，RSD為1.6%（n=6），表明重復(fù)性良好。
2.7回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取9份已知含槲皮素量的藥材粉末0.25g，依次加入低、中、高3種質(zhì)量濃度槲皮素對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果平均回收率為99.87%，RSD為0.9%（n=9）。
2.8樣品含量測(cè)定按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按照“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，不同部位測(cè)定結(jié)果見表1，不同種測(cè)定結(jié)果見表2。
表1三葉鬼針草不同部位中槲皮素的含量（略）
表2鬼針草屬不同種中槲皮素的含量（略）
3討論
實(shí)驗(yàn)曾考察了甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；甲醇-0.4%磷酸溶液（45∶55）；甲醇-0.4%磷酸溶液（40∶60）；甲醇-0.4%磷酸溶液（41∶59）為流動(dòng)相，流速1ml·min-1，柱溫30℃，以KromasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm）為分析柱。本實(shí)驗(yàn)以甲醇-0.4%磷酸溶液（41∶59）為流動(dòng)相，槲皮素峰可以達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱，分離度好。本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可以作為控制鬼針草屬藥材質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一。
就化學(xué)成分槲皮素的角度考慮，不同部位以葉入藥最好，其次是莖，因此建議鬼針草屬藥材以地上部分為好；就不同種而言，以白花鬼針草槲皮素含量最高，質(zhì)量最好。