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洋薊CynarascolymusL.又名朝鮮薊、菊薊、菜薊、荷蘭百合,為菊科菜薊屬多年生草本植物,原產地中海地區，20世紀90年代傳入我國，在浙江、云南等地有一定規模栽培［1］。洋薊有較高營養價值和藥用價值,經研究發現洋薊葉中含有綠原酸、洋薊素、黃酮類化合物、天冬酰胺等成分，可促進膽汁分泌，促進氨基酸代謝，具有抗氧化、降低膽固醇、抗微生物等活性作用。用于治療消化不良、肝病等疾病［1］。
洋薊素（Cynarin）又稱洋薊酸，朝鮮薊酸，菜薊素，洋薊苷，1,3-二咖啡酰奎寧酸，是洋薊抗氧化、抗微生物作用的主要活性成分之一［2，3］。明確洋薊中的洋薊素含量，對于洋薊的食用、藥用成分等綜合開發有著重要的意義。目前,只有對洋薊中的綠原酸及天冬酰胺進行含量測定的報道［4，5］，洋薊葉中的洋薊素含量測定國內尚未見報道。本實驗就云南省引進栽培的洋薊中洋薊素的提取及檢測分析方法進行了初步研究，篩選并建立了快速、準確測定洋薊素含量的反相高效液相色譜方法。
1儀器與試劑
日本島津SPD-10AT高效液相色譜儀：SPD-10Avp檢測器；SIL-10AP自動進樣器；超純水器(arium611UF,Sartorius)；超聲波清洗器(AS3120A，天津瑞森特)；電子天平(AdventurerTM，AR2140，上海奧豪斯公司)；旋轉蒸發儀(R-200,瑞士Buchi)。島津UV2100型紫外-可見光譜儀。
乙腈、甲醇為色譜純；實驗用水為超純水，蒸餾水自制，其它試劑均為國產分析純試劑。洋薊素對照品購自成都普瑞法科技開發有限公司（純度≥98%）。洋薊葉由昆明卡麥生物科技有限公司提供，栽種于云南省陸良縣。洋薊樣品由云南中醫學院楊禮攀副教授鑒定為菊科菜薊屬CynarascolymusL.的干燥葉。
2方法和結果
2.1色譜條件色譜柱為島津Shim-packCLC-ODS柱（150mm×6mm，5μm），流動相為乙腈-2%的醋酸水溶液（13∶87），流速1ml·min-1，檢測波長320nm，柱溫30℃，進樣量20μl。
2.2對照品溶液的制備稱取洋薊素適量，精密稱定，用流動相溶解，制成每毫升含洋薊素0.196mg的對照品儲備液,置于4℃的冰箱中避光保存。取對照品溶液適量，加流動相制成0.0049，0.0098,0.0196，0.049，0.098mg·ml-1系列標準溶液。
2.3供試品溶液的制備取洋薊葉樣品粉末（洋薊葉陰干，粉碎過50目篩）約2.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加入蒸餾水25ml,加熱回流提取30min（加熱溫度：85℃）,放冷濾過,藥渣加25ml蒸餾水,按上述方法回流再提取1次,濾液過濾后合并,濃縮蒸干,殘渣加流動相溶解,轉移至100ml棕色容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,溶液經0.45μm濾膜過濾,作為供試品溶液。色譜圖見圖1。
圖1HPLC色譜圖（略）
2.4線性關系和檢測限將“2.2”項下制好的系列濃度的對照品溶液分別進樣20μl，以其組分峰面積Y對其質量濃度X（mg·ml-1）進行線性回歸，得到回歸方程：Y=6E+07X-1725.3，r=0.9998,線性范圍：0.0049～0.196mg·ml-1。將標準品溶液無限稀釋，測出檢出限為0.05μg·ml-1（S/N=3）。
2.5精密度實驗將“2.2”項下制好的標準溶液（0.196mg·ml-1）按色譜條件平行測定5次，計算出洋薊素峰面積的相對標準偏差為0.93%,表明儀器精密度良好。
2.6穩定性實驗取樣品試液（“2.3”項方法配制）放置0，1，2，6，16，24h，分別按“2.1”色譜條件測定，測得洋薊素的峰面積RSD為1.20%。表明樣品放置24h穩定。
2.7回收率實驗精密稱取已知含量的洋薊葉樣品粉末1.2g,加入一定量的洋薊素對照品液,按供試品制備測定方法操作,計算回收率，結果洋薊素平均回收率為98.12%，RSD為1.01%（n=5）。
2.8樣品的測定按“2.3”項方法制備的樣品溶液，采用上述色譜條件進行分離,經測定，洋薊葉樣品中洋薊素的含量（質量分數）為0.683%（n=3）。
3討論
3.1流動相的選擇由于洋薊素為有機酸,因此采用酸性流動相，實驗中對甲醇-2%醋酸水溶液、乙腈-2%醋酸水溶液、乙腈-4%醋酸水溶液、乙腈-0.1%磷酸水溶液流動相體系進行了篩選，發現乙腈-2%醋酸水溶液的分離效果較好，樣品中洋薊素峰形對稱并達到基線分離。最終選擇乙腈-2%醋酸水溶液（13：87）為流動相。
3.2檢測波長的選擇對洋薊素對照品溶液在200～450nm的范圍內進行掃描，得到洋薊素的紫外吸收光譜，如圖2。從圖2中可看出洋薊素在220，295，320nm處出現3個吸收峰，考慮到在短波長處樣品中其他組分的干擾較大，最后選取320nm作為測定洋薊素的檢測波長。
3.3提取溶劑的選擇實驗中比較了甲醇、乙醇、水、乙醇-水（40∶60）作為提取溶劑對提取效果的影響。結果顯示采用甲醇、乙醇、乙醇-水（40∶60）作為提取溶劑時，提取率不及水提取方法，且醇提取物雜質多,測定時干擾較大,不利于色譜分離。因此選用水作為提取溶劑。
由于洋薊葉提取物具有良好的藥用價值，對多個系統疾病具有良好的治療作用,具有較好的開發前景。本研究采用HPLC法測定洋薊葉中洋薊素含量，方法快速、簡便、準確，測定結果可靠，為洋薊在食品開發及醫藥應用上提供了科學依據。