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虎眼萬年青Ornithogalumcaudatum為百合科虎眼萬年青屬多年生草本植物,別名有珍珠草、葫蘆蘭、胡連萬年青、鳥乳花和海蔥等[1]。原產于非洲南部,主要分布區域為東半球溫帶地區。早在20世紀70年代,虎眼萬年青就曾以觀賞植物引進中國,但其卻還是一味民間中草藥,葉、鱗莖及全草均可入藥,對肝硬化、跌打損傷和肝炎等病癥均具有很好的治療效果[2]。近年來的研究表明,虎眼萬年青中分離出的皂苷“OSW-1”對乳腺癌、肺癌具有明顯的抗癌活性作用[3-4]。經體外抗P338淋巴細胞白血病活性研究結果表明,“OSW-1”是常見抗癌藥物喜樹堿、阿霉素、紫杉醇抗癌活性的10~100倍[5-6]。由于虎眼萬年青所具有的顯著醫療效果和潛在的市場效益,使其已經成為極具開發前景的中草藥。現就近期針對虎眼萬年青藥理學和生物繁殖方面的研究加以介紹,以期為虎眼萬年青的開發利用和臨床運用提供參考。
1原植物形態、生物學特征及采收
多年生草本植物,鱗莖為卵狀球形,綠色,具有膜質外皮。葉基生,常綠,革質,呈帶狀條形,先端外卷成尾狀,葉長30~60cm,寬3~5cm。總狀花序或傘形花序,花葶粗壯,稍彎曲,花序高達1m,小花常數十朵,密生于總狀花葶上,不斷向上開放,花被6片,分離,白色,中央具有1條綠色的條帶,雄蕊有6枚,短于花被片。蒴果為3裂,呈倒卵狀球形,種子多數,黑色或暗黑色;花期3~6月[7]。性喜陽光,亦耐半陰,怕陽光直射;好濕潤環境,耐寒,冬季重霜后葉叢仍保蒼綠;鱗莖具有夏季休眠習性,鱗莖分生力強,繁殖系數高[8]。本品采收時間多為每年的9月15至9月20日,采收時全株連根挖出,抖凈泥土,將其洗凈切碎,球莖、根、葉分別擺入室內在溫度為55~60℃進行烘干,需要及時翻倒以便排潮氣,烘干最好采用熱風氣流烘干法,直至含水分13%~14%時貯藏備用[10]。
2虎眼萬年青的生物繁殖
2.1經典繁殖方法虎眼萬年青宜選擇陽光充足和濕潤的環境,土壤需深厚、肥沃和排水良好,常用分球和播種的方法繁殖。自然分球繁殖,一般于8~9月掘起鱗莖,再按照大小分級栽種,栽種后經數年待鱗莖擁擠時,可再行分球;播種繁殖,實生苗在培育2~4年才能開花[8]。
2.2組織培養法隨著對虎眼萬年青需求的增加,普通的繁殖方法已經不能滿足市場的需求,而利用組織培養方法則可以較好地滿足商業性種植對種苗的需求,也可以為快速繁殖育苗和實現生產工廠化等現代化得生產管理模式提供便利。彭世勇等[26]以虎眼萬年青的鱗片為外植體進行了組織培養的研究,得出采用鱗片以內表面向上接種的方式最好,并獲得了最佳增殖培養基、最佳誘導培養基以及最佳生根培養基。2009年,楊國會等[27]研究了不同的碳源對于虎眼萬年青離體生長的影響,實驗得出蔗糖是虎眼萬年青離體生長最佳的碳源,并且當蔗糖質量濃度是30g•L-1時,虎眼萬年青離體生長的長勢最好,繁殖系數最高。相對于以上兩則報道,屈云慧等[28]則采用了新興的組織培養方法———無糖組培,獲得了最優的無糖生根培養基,配方為當基質中NAA質量質量濃度為0.1mg•L-1時,再生芽的生根率可達到94%,并且所得無糖組培種苗質量優于常規組培。此外,早在1997年,張光輝[29]就研究了在MS培養基上虎眼萬年青鱗片外植體最佳激素的組合和濃度的配比。而2008年,楊國會等[30]則篩選了適合虎眼萬年青組培的最優抗生素,得出當青霉素質量濃度為20mg•L-1,在抑制細菌和真菌還是在誘導率方面,均好于其他各種質量濃度的幾種抗生素。
3虎眼萬年青藥理學研究
3.1免疫增強作用虎眼萬年青含有多種多糖、生物堿和皂苷,其中多糖類化合物對免疫功能具有較強的調節作用,從而使之表現出具有一定的抗衰老、抗病毒和抗腫瘤的作用[11-12]。虎眼萬年青中多糖含量高達10%左右,石磊[13]等通過機體非特異性免疫和體液免疫功能的實驗,證明了虎眼萬年青多糖可以有效地增強小鼠非特異性免疫及體液免疫功能,并同時篩選出了虎眼萬年青多糖中的有效組分。石磊等[14]利用篩選并優化出的中性多糖活性組分,又進行了細胞免疫、體液免疫及細胞因子變化等細胞和分子水平方面的研究,證明虎眼萬年青中性多糖可以增強小鼠T和B淋巴細胞的轉化,促進小鼠脾細胞產生出白細胞介素,并且提高NK細胞毒活性,還能促進T細胞的增殖反應,進一步說明中性多糖增在強機體多種免疫功能方面具有較強的作用。2004年石磊等[15]進一步探討了虎眼萬年青中性多糖對T細胞及其相應細胞因子白細胞介素(IL-2)mRNA表達的影響,證實了虎眼萬年青中性多糖對輔助性T細胞具有增強作用,而對抑制性T細胞具有降低作用,并及能促進IL-2的mRNA表達量,在基因水平進一步證實了虎眼萬年青中性多糖具有提高小鼠免疫功能的作用。
3.2抗肝癌、肝損傷作用在民間虎眼萬年青可用于化瘀解毒,治療肝硬化、肝炎、肝癌等病癥。王強[16]曾以白血病雞胚為模型,驗證了虎眼萬年青皂苷(OSW-1)和鏈激酶(SK)的聯合作用,具有抗癌細胞轉移的效果,并且對不同種類的腫瘤細胞株表現出一定的抑制作用。雖然皂苷“OSW-1”抗癌活性非常高,并且已經在中國科學院上海有機所成功合成[17],但是其提取合成工藝復雜,并且較昂貴,給廣泛的應用研究和實驗工作帶來一定困難。因而延邊大學附屬醫院的千昌石等[18]和金星林等[19]分別檢測了虎眼萬年青總皂苷對由二乙基亞硝胺所致的大鼠肝癌變過程中肝組織血管內皮生長因子受體表達的影響,證明了虎眼萬年青總皂苷可以干預肝損傷、硬化階段的肝細胞增生。此外,千昌石等[20]還研究了虎眼萬年青總皂苷在大鼠肝癌病變過程中對自由基代謝的影響,表明了其具有干預自由基代謝的作用,并可以抑制肝損傷硬化和肝癌的發生和發展。武漢市第七醫院肝病科的研究人員對虎眼萬年青抗四氯化碳致大鼠急性肝損傷做出了相應報道。嚴紅梅等[21]研究了虎眼萬年青對大鼠急性肝損傷的防治作用,得出了虎眼萬年青可以顯著降低急性肝損傷的大鼠血清谷丙轉氨酶(ALT),谷草轉氨酶(AST)活性,并且提高大鼠血清前白蛋白(PA)水平的作用。而嚴佑琴等[22]則探討了虎眼萬年青對急性肝損傷大鼠的肝臟枯否氏細胞的作用,證實虎眼萬年青可以抑制枯否氏細胞的表達。以上兩則報道證明了虎眼萬年青對四氯化碳致大鼠急性肝損傷有明顯的防治作用。
3.3抗炎及其安全性研究虎眼萬年青除具有抗癌作用外,還具有抗炎消毒的功效,此功效為張曉丹等[23]的報道所證實。他們得出虎眼萬年青乙醇提取物可以明顯的延長小鼠疼痛閾值,抑制由二甲苯所導致的炎癥反應,降低其毛細血管通的透性,并可明顯減輕小鼠耳廓腫脹,說明虎眼萬年青乙醇提取物具有明顯的鎮痛和抗炎作用。由于虎眼萬年青的報道和開發利用,研究人員開始關注其使用的安全性。2007年王繼嵐等[24]對虎眼萬年青乙醇提取物進行了精子畸形試驗、微核試驗和鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗,結果得出虎眼萬年青乙醇提取物未出現致突變作用。2年后,金星林等[25]觀察了虎眼萬年青總皂苷對幼鼠急性毒性的作用,結論為虎眼萬年青總皂苷具有一定的毒性,認為虎眼萬年青總皂苷在應用中應必須較好的把握一次性劑量。傳統觀念認為中藥無毒、安全的想法是不正確的,醫學中的施藥劑量需要謹慎,切忌濫用,要做到藥到病除,又注重病除而藥止。
4結語
虎眼萬年青是一味化學成分復雜和藥理作用明顯的中草藥,尤其是在抗肝癌和抗炎癥方面的作用,使其成為一種極具開發、研究前景的中草藥。作者認為今后對于虎眼萬年青的研究工作還可以從以下幾個方面深入。對于藥理作用而言,首先是否可以將研究對象進一步擴大,比如可擴大到以生物堿等為研究對象;而有關鎮痛抗炎和防治肝損傷的研究又是否可以繼續深入至細胞、分子等微觀層次;總皂苷的研究結果是否可以追溯到具體起作用的物質或成分。其次在進行了大量動物實驗的基礎上,是否可以謹慎的進行臨床實驗,以獲得大量真實的臨床醫學數據,當然虎眼萬年青總皂苷具有一定的毒性,在施用其原藥材時應對癥考慮適合的用量;最后可以考慮如何解決藥理學實驗數據與中醫辨證論治理論結合與統一的問題。應繼續加大生物繁殖研究的力度,由于虎眼萬年青中的皂苷“OSW-1”的分子結構特殊,人工合成代價高而且費時又費力,今后一段時間以內其藥效成分的來源將仍然主要是原藥材,所以其人工繁殖勢在必行。對于生物繁殖而言,首先可對其經典繁殖的方法加以改進,優化分球和播種繁殖各階段的條件,并嘗試運用其他經典繁殖方法。其次可完善組織培養后期的相關研究,如可從煉苗、移栽和中藥規范化栽培種植等方面著手研究。當然還應考慮組織培養的方法與虎眼萬年青藥效成分含量的關系。